【摘要】 目的优选出金银花最佳采收阶段和产地加工方法。方法用高效液相色谱（HPLC）法测定不同采收期和不同加工方法的金银花中绿原酸的动态变化。结果确定金银花的最佳采收期为三青、二白和大白阶段，产地加工可采用直接晒干和烘干等方法。结论 此研究为道地药材封丘金银花的质量控制提供参考。
【关键词】 高效液相色谱； 采收期； 产地加工； 道地药材
Abstract：ObjectiveTo optimize the best stage of collection and the process method in the producing area of Flos Lonicerae.MethodsThe contents of Chlorogenic acid of Flos Lonicerae which were collected in different stages and processed by different methods were determined by HPLC.ResultsThe best collection period and the process technologies were determined.ConclusionThis study provides a reference to the quality control of famousregion drug.
Key words：HPLC; Collection period; Processing technololgy; Famousregion drug
金银花为一常用中药，是忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，具有清热解毒、疏散风热之功效。河南封丘金银花为道地药材［1］。本实验针对河南封丘GAP基地金银花进行不同采收期和不同加工方法的研究，为道地药材合理的开发和利用提供依据。
1 器材
2010A高效液相色谱仪（日本岛津），PDAD检测器；电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；甲醇（天津科密欧化学试剂开发中心，色谱纯）；乙腈（江苏百林试剂厂，色谱纯）；磷酸（开封化学试剂厂，分析纯）；绿原酸对照品（中国生物制品检定所）。
金银花药材分别于200405～200409采自封丘金银花生产基地，分为三、二白、大白、银花、金花5个阶段，每样品按照不同地点采收3批。经河南中医学院曹继华教授鉴定为忍冬科正品金银花。
2 方法与结果
2.1 药材最佳采收期研究金银花从幼蕾开放大致可分为幼蕾（绿色的小花蕾，长约1 cm），三青（绿色花蕾，长2.1～3.4 cm），二白（淡白色花蕾长3～3.9 cm），大白（白色花蕾，长3.6～4.3 cm），银花（刚开放的白色花蕾，长3.8～4.5 cm），金花（花变黄色，长3.6～4.3 cm），凋花（棕黄色，稍有干枯）等7个阶段［2］，由于幼蕾太小，产量低，凋花质轻色泽较差，因此商品常包括5个阶段的花，花区常因花期集中（盛花期3～7 d），往往将花一起采下。封丘金银花一般一年收两季，第1次是在5月份左右，第2次采收期在9月份。我们采用高效液相色谱法对不同采收期的各样品进行绿原酸的含量测定，以确定金银花的最佳采收期。
2.2 绿原酸的动态变化研究
2.2.1 色谱条件
色谱柱：C18（Hanbon Science &Technology Co.Ltd）；流动相：乙腈-磷酸水（0.4%）15∶85；λs=327 nm；流速1 ml/min；进样量5 μl；柱温30℃。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品适量，加甲醇溶解配制成46.0μg/ml的对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
取各样品粉末约0.5 g，精密称定，置锥形瓶中，加入50%的甲醇50 ml，精密称定，超声处理30min，取出，放凉，称重，用50%的甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5 ml，用50%甲醇定容至25 ml，0.45 μm的滤膜滤过，即得各供试品溶液。
2.2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液各4，8，12，16，20 μl注入液相色谱仪，以对照品的量为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，线性关系良好。
Y＝3 135 429.891X－8 202.3 （r＝0.999 9）
2.2.5 精密度实验
精密吸取对照品溶液5 μl ，按照上述色谱条件连续进样5次，依法测定，以绿原酸峰面积计算，RSD=0.45%，符合要求。
2.2.6 重现性实验
精密吸取封丘供试品溶液5 μl，按照上述色谱条件连续进样5次，依法测定，以绿原酸峰面积计算，RSD=1.02%，符合要求。
2.2.7 稳定性实验
精密吸取同一份供试品溶液5μl，按照上述色谱条件在0，0.5，1，2，4 h进行测定，以绿原酸峰面积计算，得RSD=0.89%，符合要求。
2.2.8 加样回收率实验
取已知含量的金银花生药粉末，精密称取6份适量，分别精密加入绿原酸对照品适量，按照供试品溶液的制备方法得到样品溶液，再照上述色谱条件进行绿原酸的含量测定，计算回收率。结果见表1。表1 样品绿原酸回收率结果（略）
2.2.9 样品的测定
分别精密吸取上述各供试品溶液及对照品溶液各5 μl，按照上述色谱条件进行测定，将所得绿原酸峰面积带入回归方程计算，得到不同采收期金银花绿原酸含量。结果见表2。表2 不同采收期药材中绿原酸的含量（略）
2.3 不同产地加工方法的研究［3,4］
忍冬花从花开期到花末期共大概30 d的时间，其花蕾密集生于小花枝上，采摘时间最好为晴天上午露水干后采摘。采摘金银花的盛器必须通风透气,一般使用竹篮或条筐,不能用书包、提包或塑料袋,以防采摘下来的花蕾蒸发的水分不易挥发再浸湿花蕾,热量不易散失而发热发霉变黑等，采摘的花蕾均轻轻放入盛具内，不能紧压，避免伤花及发热，要做到“轻摘、轻握、轻放”。这样的鲜品经加工后，成色好，香气浓郁，能保持良好的生药性状。
直接晒干法:鲜品采回后，松散地薄薄地摊于竹篾或干净的水泥地上暴晒，但温度不宜超过40℃。尽量少翻动，否则花色欠佳或花蕾断碎，更不可将花堆积日久，否则花色会变成黑褐色。晒干法简便易行，但须天气晴朗，一天内可晒至6～7成干。及时暴晒至干者，颜色是黄绿相间的，但颜色不太稳定，放置过久可能会变成棕黄色，需反复晾晒至完全干燥后置干燥器中保存。
直接阴干法和烘干法:阴干是把鲜品置通风处薄摊凉干，烘干则是把鲜品置烘箱中或炕上，分层薄摊，于60℃左右烘干。此两法干燥时，一定要薄摊，亦忌随意翻动。所得样品与晒干者相似，也需完全干燥后密封保存。
水洗后烘干：因封丘地处黄河滩，风沙较大，自行采集一些生品用水迅速淋洗后，于60℃烘干，烘干时要薄摊，忌随意翻动，所得样品与晒干者相似，完全干燥后密封保存。
供试品溶液的制备方法：分别取上述4种加工方法制得的样品粉末约0.5 g，精密称定，置锥形瓶中，加入50%的甲醇50 ml，精密称定，超声处理30 min，取出，放凉，称重，用50%的甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5 ml，用50%甲醇定容至25 ml，0.45 μm的滤膜滤过，即得各供试品溶液。
